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外源基因在酵母中的诱导表达实验操作标准流程Protocol-2019版(第三版)

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外源基因在酵母中的诱导表达实验方法与操作流程Protocol-第三版2019:以GAL1为启动子的酵母表达质粒pYES2为例

2019版-第三版

1、先在含2%葡萄糖的泛基诺Ura Minus Media (SD/-Ura:SD/-Ura = Sc-Ura))培养基(货号YGM003A-3)中30度,280转/分钟震荡培养至OD600大约1.2-1.4

2、1000转离心5分钟弃上清

3、用200—300ml泛基诺Ura Minus Media(Sc-Ura)不含任何糖的液体培养基悬浮细胞,充分混匀,离心弃上清。

4、加500ml(Sc-U)不含任何糖的培养基,继续震荡培养3小时,使得细胞内的葡萄糖耗竭(备注:葡萄糖是GAL启动子的强烈抑制剂,在微量葡萄糖存在的情况下,GAL1启动子驱动的基因均不会表达)

5、离心弃上清,换成新的500ml Sc-Ura培养基(YGM003A-3)同时加棉子糖和半乳糖(终浓度均是2%)继续震荡培养8-12小时。如果异源表达蛋白对酵母细胞来说毒性大,那么表达时间不宜超过5小时。(这里不应误解毒性的概念。即使常规蛋白对于异源细胞来说也具有一定的毒性)。应特别注意:棉子糖和半乳糖均不能高压灭菌,建议先配置40%经过滤除菌的无菌母液(泛基诺公司有售)。

6、上述Protocol没有提及或不能解决的疑难问题,客户可联系北京泛基诺市场与技术联合办公QQ:2827505022

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