外源基因在酵母中的诱导表达实验操作标准流程Protocol-2019版（第三版）

外源基因在酵母中的诱导表达实验方法与操作流程Protocol-第三版2019：以GAL1为启动子的酵母表达质粒pYES2为例

2019版-第三版

1、先在含2%葡萄糖的泛基诺Ura Minus Media （SD/-Ura：SD/-Ura = Sc-Ura））培养基(货号YGM003A-3)中30度，280转/分钟震荡培养至OD600大约1.2-1.4

2、1000转离心5分钟弃上清

3、用200—300ml泛基诺Ura Minus Media（Sc-Ura）不含任何糖的液体培养基悬浮细胞，充分混匀，离心弃上清。

4、加500ml（Sc-U）不含任何糖的培养基，继续震荡培养3小时，使得细胞内的葡萄糖耗竭（备注：葡萄糖是GAL启动子的强烈抑制剂，在微量葡萄糖存在的情况下，GAL1启动子驱动的基因均不会表达）

5、离心弃上清，换成新的500ml Sc-Ura培养基（YGM003A-3）同时加棉子糖和半乳糖（终浓度均是2%）继续震荡培养8-12小时。如果异源表达蛋白对酵母细胞来说毒性大，那么表达时间不宜超过5小时。（这里不应误解毒性的概念。即使常规蛋白对于异源细胞来说也具有一定的毒性）。应特别注意：棉子糖和半乳糖均不能高压灭菌，建议先配置40%经过滤除菌的无菌母液（泛基诺公司有售）。

6、上述Protocol没有提及或不能解决的疑难问题，客户可联系北京泛基诺市场与技术联合办公QQ：2827505022