蛋白质定位－细胞器染料或荧光探针的妙用

蛋白质定位－细胞器染料的妙用
细胞器染料
    这里的细胞器染料主要是指细胞器荧光探针，我们特选取红色荧光染料以便于和绿色荧光蛋白（GFP）配对进行蛋白质定位实验研究。
研究策略：将目的基因与绿色荧光蛋白（GFP或EGFP）进行框架内融合构建，最好将目的基因放在N端，荧光蛋白放在C端（要了解其中的原理可发电子邮件到fungenome@126.com咨询）。
    细胞器染料在激发光作用下发出红色荧光，与GFP的绿色荧光形成光学上的互补色，如果目的蛋白定位于某个细胞器，则绿色荧光与相应的细胞器染料的红色荧光互补形成黄色位点（foci)

规格： 1ml 应用液 北京泛基诺科技

细胞器知识回顾:
线粒体
线粒体（mitochondrion）是存在于大多数真核生物（包括植物、动物、真菌和原生生物）细胞中的细胞器。线粒体一般呈粒状或杆状，但因生物种类和生理状态而异，可呈环形，哑铃形、线状、分杈状或其它形状。线粒体作是细胞的能量工厂，因其主要功能是将有机物氧化产生的能量转化为ATP，是有氧呼吸产生能量的主要场所。近年来线粒体与细胞凋亡关系的发现使得它成为细胞生物学与分子生物学研究的热点

内质网
内质网（ER,Endoplasmic Reticulum），是细胞质内由膜组成的一系列片状的囊腔和管状的腔，彼此相通形成一个隔离于细胞基质的管道系统，为细胞中的重要细胞器。可分为粗面内质网（RER, Rough Endoplasmic Reticulum）和滑面内质网（SER, Smooth Endoplasmic Reticulum）两大部分（粗面内质网也称为糙面内质网或颗粒型内质网，滑面内质网也称为光面内质网或非颗粒型内质网）。粗面内质网上附着有核糖体，是合成蛋白质的主要场所；滑面型内质网与蛋白质的合成无关,但其功能则更为复杂,它可能参与糖元和脂类的合成、固醇类激素的合成以及具有分泌等功能。内质网联系了细胞核和细胞质、细胞膜这几大细胞结构，使之成为通过膜连接的整体。内质网负责物质从细胞核到细胞质，细胞膜以及细胞外的转运过程。

高尔基体
高尔基体（Golgi apparatus）是由数个扁平囊泡堆在一起形成的高度有极性的细胞器。常分布于内质网与细胞膜之间，呈弓形或半球形，凸出的一面对着内质网称为形成面（forming face）或顺面（cis face）。凹进的一面对着质膜称为成熟面（mature face）或反面（trans face）。顺面和反面都有一些或大或小的运输小泡，在具有极性的细胞中，高尔基体常大量分布于分泌端的细胞质中。因其看上极像滑面内质网，因此也有人认为它是由滑面内质网进化而来的。高尔基体的主要功能将内质网合成的蛋白质进行加工、分类、与包装，然后分门别类地送到细胞特定的部位或分泌到细胞外。高尔基体普遍存在于植物细胞和动物细胞中，动物细胞中的高尔基体与细胞分泌物形成有关，高尔基体本身没有合成蛋白质的功能，但可以对蛋白质进行加工和转运，因此有人把它比喻成蛋白质的“加工厂”。植物细胞分裂时，高尔基体与细胞壁的形成有关。

溶酶体
溶酶体（lysosomes）为单层膜包被的囊状结构，直径约0.025～0.8微米；内含多种水解酶，专司分解各种外源和内源的大分子物质。
传统分类：根据内含物和形成阶段的不同，溶酶体可分为两大类，具有均质基质的颗粒状溶酶体称为初级溶酶体（primary lysoso－me），含有复杂的髓磷脂样结构的液泡状溶酶体称为次级溶酶体（secondary lysosome）。
新提法：根据溶酶体的形成过程和功能，把溶酶体命名为前溶酶体(endolysosome)和溶酶体。内吞体与高尔基体的转运小泡融合成前溶酶体，它从高尔基体转运小泡接受了新合成的水解酶和溶酶体膜蛋白，并开始水解内吞的物质。当前溶酶体失去明显的内吞体膜成分，pH再进一步降低，即成为溶酶体。吞噬体与前溶酶体或溶酶体融合成吞噬溶酶体；自噬体与前溶酶体或溶酶体融合形成自噬溶酶体。吞噬溶酶体和自噬溶酶体将物质水解成小分子物质，被细胞吸收，还残留一些不被消化和吸收的物质称为残质体。