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细胞增殖检测方法 EdU 与 BrdU

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细胞增殖检测方法:EdU  BrdU

 

直接测定DNA合成是细胞增殖检测的最准确方法之一,是测定物质毒性、评估药物安全、细胞健康的基本方法,其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物----BrdU进行检测。因为在细胞周期的S期和细胞一起孵育的BrdUDNA分子中,再结合BrdU抗体与DNABrdU特异性结合,就能够检测到DNA复制活跃的细胞。

    

BrdU有一大缺点,就是需要变性DNA后才能与抗体结合,但这就破坏了DNA双链结构,影响了其他染料的结合染色,导致染色弥散,准确性降低等问题。哈佛大学医学院细胞生物学家Adrian Salic就认为:为了能够暴露BrdU的抗原表位,必须用高浓度的盐酸乙酸或酶解,但经历了如此严重的处理后,细胞原本精巧细致的结构在显微镜下就变得惨不忍睹了。

    

事实上,现在有一种新的检测方法能避免这种情况的发生---EdU检测。EdU (5-乙炔基-2脱氧尿嘧啶核苷)也是一种胸腺嘧啶核苷类似物,但其连有的炔羟基团在天然化合物中很少见,在细胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子中,基于EdU与染料的共轭反应可以进行高效快速的细胞增殖检测分析,可以有效地检测处于S期的细胞百分数。与传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法相比,更简单,更快速,更准确。EdU只有BrdU抗体大小的1/500,在细胞内更容易扩散,不需要严格的样品变性(酸解、热解、酶解)处理,有效地避免了样品损伤,有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增殖的真实情况,具有更高的灵敏度和更快的检测速度。Adrian Salic特别强调:与传统的免疫荧光染色不同,EdU反应能在几分钟内完成,且不需要进行严格的样品变性处理,使得组织成像更简单易行。

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