流式细胞仪分选与磁珠分选(MACS)

                                流式细胞仪分选与磁珠分选(MACS)

一、流式细胞仪分选原理

流式细胞仪分选细胞有两种方法;一是“CatchTuber"即“捕获管法”就是机械手臂以极快的速

度出入样品液流，在细胞通过激光照射并被确认之后快速捕获目标细胞至收集系统中，此种方法常用干小型台式机。另一种方法是络带光热色确认的细胞标记正或负电荷，通过电磁场偏转而分离，此种方法常用于大型科研型机器。分选后细胞可进一步做分子生物学研究，如 PCR、细胞培养等。

二、MACS分选原理

将特定单克隆抗体的免疫球蛋白的两条特异性F(ab)段的一条标记磁珠，另一条与细胞表面抗原的抗原决定簇特异性结合。这样，标记单抗后的细胞经过MACS 后，有磁性的细胞被吸附而得以分选。

三、两者对比

鉴于两种分选原理的不同，流式细胞仪比MACS分选有以下优越性

1、流式细位内式机器，得分析与分可同步进行，无需稳定，完全达到全

自动分选。而MACS与流式细胞仪是分离的，分析和分选分别进行，无法对分析的细胞进行特定分选。

2、流式细胞仪分选的原理在机械和电子系统设计，与细胞标记的方法无关，只要是流式细胞仪分析检测的细胞都可以用流式分选，不仅能分荧光单克隆抗体标记的细胞，也能分其他荧光探针标记的细胞(如PI标记的不同细胞周期细胞，PI 标记的原理是与DNA双螺旋结构以共价键结合，而不是免疫球蛋白的抗原抗体结合)。而MACS只能分选荧光单克隆抗体标记的细胞，也就是说只能分诸如CD3、CD4等单抗标记的细胞。

3、流式细胞仪可根据细胞表面的几种标记物的分析结果，进行多参数的综合分选，而 MACS每次只能根据一个参数分选。如CD3+、CD4+双阳性细胞在流式细胞仪上可一次分选，而在MACS上必须两次才能分选出来。

4、流式细胞仪的分选纯度可达到95%以上，而MACS一般纯度在50~80%。

5、在分选后细胞的后处理方面，流式细胞仪分选细胞的标记物是荧光素，MACS分选细胞标记物是磁珠，而荧光素较比磁珠更容易被洗脱。

6、应用流式细胞仪的分选，可以使得分析与分选同步进行，无需另外购买磁珠抗体，直接根据分析结果进行多参数同步分选，即节约抗体等耗材的消耗，又使得分选结果更加符合课题的需求。

7、常规的磁珠分选只能根据免疫标记的单克隆抗体结合磁珠抗体进行，因而只能分选类似

CD3\CD4\CD8等T细胞亚群等，而对于根据荧光探针标记分析的不同细胞周期的细胞则无法分

选，例如在肿瘤细胞研究中，我们要分选出S期细胞，进一步进行PCR、FISH等分子生物学研究或者研究增殖期细胞的其他生物学活性，这样流式细胞仪分选就有了很大的优势。

四，流式细胞仪分选在研究中的应用举例

FACSCalibur 的分选是小型分选器，完全内置，全自动，无需液流稳定，完全符合无菌要求，适用于分选后细胞培养和进一步的分子生物学研究。例如，对于基因转染阳性细胞的筛选，或者单一细胞群体分选后进行PCR、FISH等分子生物学研究，是当今生物医学前沿领域研究的理想方法。