2022版外源基因在酵母中诱导表达操作流程Protocol-附高效酵母转化方法

Strategy and Protocol for induced expression of foreign genes 
in yeast
High efficiency yeast transformation
以GAL1为启动子的酵母表达质粒pYES2为例，酵母菌株：InvSc1 或W303-1A，W3031-B 或YPH499,YPH500

酵母单杂交系统：转录因子万花丛中的夏日玫瑰

三十年前，从德国电影《英俊少年》中认识了音乐《夏日里最后的玫瑰》，沉湎在幻想中，陶醉在音符里。正是在这一年，我入道江湖，开始从事生命科学研究，第一站便选择了酵母遗传学。泛基诺技术部陈博有一句发人深省的话：一个向深度发展的生命科学与医学研究实验室尤其是分子生物学实验室，正象离不开大肠杆菌的操作一样,离不开酵母的实验操作。

细胞增殖检测方法 EdU 与 BrdU

在细胞周期的S期和细胞一起孵育的BrdU能掺入DNA分子中，再结合BrdU抗体与掺入DNA的BrdU特异性结合，就能够检测到DNA复制活跃的细胞。
EdU检测与传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法相比，更简单，更快速，更准确

《Science》经典解析：RAD51是Dmc1介导的减数分裂联会分子形成的从属性因子

Rad51和Dmc1与单链DNA束（DNA tracts）结合，通常在DNA双链断裂（ doubl2-strand break 简称DSB）旁侧形成核蛋白丝。核蛋白丝的功能是在DSB附近搜寻可供配对的非断裂的染色体或同源分子（备注：寻找模板时，姐妹染色单体优先于同源分子被使用）并将包裹以形成联会分子（joint molecules, 简称JM）。
Rad51是唯一在有丝分裂周期中形成联会分子中发挥作用的蛋白，而Dmc1则是减数分裂特异性调控蛋白。减数分裂过程中的重组既依赖于Dmc1，也需要借重Rad51。

Co-IP蛋白质免疫共沉淀方法与注意事项

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

GST Pull-down Protocol

酵母细胞裂解液泛素化蛋白检测方法

酵母细胞裂解液泛素化蛋白检测方法
Detection of a ubiquitinated protein from a yeast lysate
Autoclaving nitrocellulose membranes to improve detection of ubiquitin immunoreactivity

酵母基因组文库构建方法